El
estudio del frotis permite obtener información sobre el recuento diferencial de
los leucocitos, cambios tóxicos y presencia de células neoplásicas. Así como
también, cambios cualitativos de los eritrocitos y las plaquetas. Estos cambios
pueden estar asociados a diversas patologías.
FUNDAMENTO, TÉCNICA Y TINCIÓN.
Romanowski en 1819, fue el
primer investigador que combino azul de
metileno y eosina para teñir sangre. Existen diferentes tipos de tinciones
Romanowski ampliamente utilizadas, tales como: (a) Leishman y
Wright, (b) MayGrünwald y Jenner, (c) Giemsa, (d) Pappenheim (Hemacolor),
entre otros. En medicina veterinaria se utiliza con frecuencia las siguientes tipos de colorantes: Wright, Giemsa,
Pappenheim (Hemacolor), entre otros.
ELABORACIÓN
DEL FROTIS SANGUÍNEO
Método: Portaobjeto.
Fundamento:
Una
buena extensión deberá tener como aspectos: ser grueso en uno de los extremos y
desvanecida en el otro, de aspecto regular y uniforme. No debe presentar:
lagunas, digitaciones y ondulaciones.
Procedimiento:
·
Tomar dos láminas porta-objeto limpias.
·
Mezclar
la sangre completa varias veces por inversión suave.
·
Colocar con un aplicador una pequeña gota de
sangre en uno de los extremos de la lámina.
· Colocar la lámina extensora delante de la gota de sangre, retroceder la
lámina extensora hasta que toque la gota
y esta se extienda por capilaridad a lo largo del borde de la misma.
·
Mantener una inclinación de 30 grados entre
ambas láminas. Una vez que el borde de la lámina de porta-objeto extensor se
impregna completamente de sangre, esta se desliza hacia delante, sin hacer
presión excesiva, se recomienda realizar
un movimiento rápido, uniforme y continúo de modo que la sangre forme una
delgada película.
·
El frotis se seca realizando movimientos al
aire. No dejar en reposo. Finalmente, se procede a realizar la coloración (Wright, Giemsa,
Pappenheim (Hemacolor), entre otros.
DEFECTOS
DE COLORACIONES.
1.
Irregularidad en la intensidad de la tinción en varias zonas del
frotis.
a. Mezcla
insuficiente del colorante en la solución amortiguadora.
b. Variaciones
del pH en la superficie del porta objeto (limpieza defectuosa).
c. Durante
el secado ha quedado agua en parte del frotis. Dejar secar el porta objeto sobre
uno de sus lados, para acelerar el secado después del lavado.
2.
Aspecto de la coloración en todo el frotis.
a. Se
ha permitido que el agua actúe demasiado tiempo durante el lavado del porta
objeto o este no se escurrió con suficiente rapidez.
b. Insuficiente
tiempo de coloración.
3. Los núcleos se tiñen
débilmente, pero los eritrocitos y los gránulos de los eosinófilos
adquieren
intensa coloración con la eosina.
a. El
agua empleada para diluir el colorante o el amortiguador era ácida.
b. Se
lavo el frotis con agua ácida.
c. La
superficie del portaobjeto ácida.
4.
Los núcleos muy azules, eritrocitos verdosos o azules y
citoplasma de los leucocitos sin teñir.
a. El
agua empleada para diluir el colorante o el amortiguador era alcalina.
b. Se
lavó el frotis con agua alcalina.
c. La
superficie de portaobjeto estaba alcalina.
5.
Frotis cubierto por precipitado.
a. No
se quito bien el colorante del portaobjeto.
b. Poca
cantidad de colorante en el momento de la fijación, de modo que el alcohol que
contiene el colorante se evaporó y precipitado el colorante.
c.
El tiempo de coloración se deja por mucho
tiempo.
6.
Tinción excesiva:
a. La
tinción excesiva se corrige, sumergiendo el frotis en etanol a 95º y volviendo
a teñir, disminuyendo el tiempo.
